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  不论是种子罐还是发酵罐，当培养基（或物料）还未进罐前对罐进行预先灭菌，称为空罐灭菌，也称空消。目的是杀死全部微生物尤其是耐热芽孢，空罐灭菌要求温度比较高，灭菌时间比较久，确保杀死设备中各死角残余杂菌或芽孢。

  空罐灭菌的压力和温度都可高于实罐灭菌，保温时间也可适当延长以保证罐体的彻底灭菌。一般空消的罐压达1.6~1.8公斤／厘米2，温度为128~130℃。

  实罐灭菌是将培养基置于发酵罐中用蒸汽加热，到达预定灭菌温度后，维持一段时间，再冷却到发酵温度，然后接种发酵，也称实消或分批灭菌。操作关键点为三路进汽，三路进汽即蒸汽从通风、取样和出料口进入罐内直接加热，直到所要求温度，并维持一定时间。

  ①pH值。pH值对微生物耐热性影响很大，pH为6.0～8.0时微生物最不易死亡，pH ＜6.0时氢离子易渗透微生物细胞内；

  ②培养基的颗粒物大小。当培养基中存在比较大颗粒物质特别是凝结成团的胶体时，灭菌效果会受到影响；

  ③培养基成分。油脂、糖类、蛋白质都是传热不良介质，会增加微生物耐热性，使灭菌困难。浓度较高培养基相对需要较高温度和较长时间灭菌。高浓度盐类，色素则减弱微生物耐热性，故较易灭菌。

  （1）开启夹套蒸汽阀，使罐体温度上升至 75℃至 80℃，同时打开冷凝水排水阀，排净冷凝水。再打开取样口，让少量蒸汽排出。

  （2）当罐内温度达到 80℃至 90℃时，打开空气过滤器下的冷凝水阀门，然后启动空气管道蒸汽阀，排净冷凝水，排水约 2 至 3 分钟后，将冷凝水阀门关小，确保有微量冷凝水缓缓流出。

  （3）在升温过程中，排气阀门应保持开启状态，且罐内压力不低于 0.1Mpa。要检查各个管道蒸汽是否畅通，管道内部需保持很多压力，以防止出现灭菌死角。

  （4）当温度达到 121℃时，稍微打开接种口，让少量蒸汽排出即可。同时，需经常调节排气阀和进气阀，使罐内压力维持在 0.1Mpa 左右，持续 20 分钟。

  （5）灭菌结束后，关闭接种口、补料口、接种排气阀、夹套蒸汽阀，最后迅速关闭进气口下的蒸汽阀（注意管道内的压力），再缓慢打开进空气阀，引入无菌空气，同时打开空气过滤器下方的冷凝水阀，为空气过滤器降温。待空气过滤器冷却后，关闭此阀门。在此期间，罐内压力应保持在 0.02Mpa 以上。

  （6）待温度降至 100℃以下，关闭排污阀，打开冷水阀或自来水阀，以及回水阀。使用控制面板，将温度自动调节至 37℃。当温度降至 40℃时，停罐。

  无菌检测：在灭菌后的物品或环境中进行无菌检测，如使用无菌培养基培养、检测微生物的存在或使用特定的检测仪器。

  指示剂：使用化学或生物指示剂来监测灭菌过程。指示剂可以是特定的化学物质或微生物，它们在灭菌条件下会发生明显的变化，从而指示灭菌是否成功。

  物理参数监测：在灭菌过程中，监测关键的物理参数，如温度、压力、时间等。确保这些参数符合灭菌要求，以保证灭菌的有效性。

  验证程序：遵循特定的灭菌验证程序，包括定期的设备校准、工艺验证和再验证等，以确保灭菌过程的可靠性。

  目视检查：对灭菌后的物品进行目视检查，观察是不是有任何可见的污染或异常情况。

  历史记录分析：分析灭菌过程的历史记录，包括温度、压力等参数的变化趋势，以评估灭菌的稳定性和一致性。

  这些方法的综合应用能够给大家提供关于灭菌是否彻底的可靠信息。然而，具体的判断方法会根据灭菌的对象、要求和行业标准而不一样。在某些情况下，在大多数情况下要进行多种方法的组合使用，以确保灭菌的有效性。此外，遵循相关的标准操作规程和质量控制措施也是确保灭菌彻底的重要因素。

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